Mutações no Gene CYP21A2 Analisadas Através da Reação da Polimerase em Cadeia

Gustavo Maffra Monteiro, Carlos Virgílio Rocha de Sousa Silva, Aluísio Antônio Brito de Mesquita, Susane Vasconcelos Zanotti, Isabella Lopes Monlleó, Reginaldo José Petroli

Resumo


Objetivo: Padronizar a Reação em Cadeia da Polimerase Alelo Específico (PCR-AS) no Laboratório de Genética Molecular Humana do Hospital Universitário Professor Alberto Antunes (HUPAA) para investigação das mutações p.Pro30Leu, c.290-13A/C>G, p.Gly110fs, p.Ile172Asn, Cluster6 (p.Ile236Asn+p.Val237Glu+p.Met239Lys), p.Val281Leu, p.Gln318* e p.Arg356Trp no gene CYP21A2, todas de reconhecida frequência e provenientes do pseudogene CYP21A1P. Metodologia: As PCR-AS foram realizadas utilizando amostras controle para cada mutação. Oligonucleotídeos para a seleção do alelo com a alteração (mutante) e sem a alteração (normal) foram utilizados para cada mutação analisada. Os produtos das PCR-AS foram testados através de eletroforese em gel de agarose. A análise dos resultados das reações foi realizada através da presença ou ausência do fragmento de interesse. Resultados: Os alelos normal e mutante foram amplificados para as mutações p.Pro30Leu, c.290-13A/C>G, p.Gly110fs, p.Ile172Asn, Cluster6 (p.Ile236Asn+p.Val237Glu+p.Met239Lys), p.Val281Leu, p.Gln318* e p.Arg356Trp. Conclusão: A PCR-AS foi padronizada para as mutações mais frequentes no CYP21A2, isso possibilitará a ofertar do teste molecular aos sujeitos com diagnóstico clínico e laboratorial de HAC, atendidos no Serviço de Genética Clínica do HUPAA ou oriundos da demanda gerada pelo Programa Nacional de Triagem Neonatal em Alagoas. Além disso, será possível o reconhecimento das mutações mais frequentes no CYP21A2 na população alagoana e ampliar o conhecimento sobre as correlações genótipo-fenótipo em cada caso.


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DOI: http://dx.doi.org/10.28998/rpss.v4i1.6853

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